Taq polymérase

La Taq polymérase (aussi nommée "Taq pol" ou simplement "Taq") est une enzyme, surtout une ADN polymérase qui agit dans une certaine gamme de température. Elle a été isolée à partir de la bactérie thermophile Thermus aquaticus en 1969 (1). Sa demi-vie enzymatique à 95°C est de 40 minutes. Elle est dépourvue d'activité exonucléasique ce qui rend par conséquent impossible la correction d'erreur lors de copie.

Elle est utilisée en biochimie pour faire des réactions de PCR. Cette enzyme faisant une erreur chaque million de paire de base, l'amplicon (le produit de la réaction) sera utilisé pour analyse. Si on veut cloner le produit de réaction, alors on utilisera plutot une Pwo-polymérase ou une Pfu-polymérase, qui font moins d'erreurs.

Clonage A-T

La taq-polymérase ajoute une chaîne poly-A à la fin du fragment généré. Ceci sert à réaliser un clonage par bouts cohésifs avec un vecteur possédant des queues poly-T.

"Hot Start"

Permet de désigner une enzyme ayant un inhibiteur (protéine chaperonne ou molécule chimique). Cet inhibiteur doit être retiré par le biais d'un chauffage de l'enzyme à 95°C pendant 10 ou 15 minutes. On nomme cela l'activation de l'enzyme.

(1) Perl D et al., 2000. Two exposed amino acid residues confer thermostability on a cold shock protein. In : Nat. Struct. Biol.. 7, Nr. 5 : 380-3.

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